
1、滅菌方法
培養基的滅菌方法主要有兩種,高壓除菌及0.22um微孔濾膜過(guò)濾除菌。與過(guò)濾相比,高壓滅菌的工作強度小,成本較低,但易造成營(yíng)養成分的流失,而且在多次加樣(無(wú)菌谷氨酰胺溶液,無(wú)菌碳酸氫鈉溶液等)過(guò)程中容易造成二次污染。大多數培養基采用0.1~0.2μm孔徑的微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾滅菌,并且已成為培養基除菌的發(fā)展方向,它可低限度地減少培養基的營(yíng)養損失。
1.1 高壓滅菌
某些培養基(如MEM)可進(jìn)行高壓滅菌,例如清大天一的MEM培養基中的MD605、MD609等。這類(lèi)培養基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉,一般是在培養基高壓滅菌后加入L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉的無(wú)菌的液體。另外可高壓的谷氨酸鹽(如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)可代替L-谷氨酰胺。
可高壓滅菌的培養基在121℃、15psi,15分鐘的條件下完全可達到滅菌效果及營(yíng)養成分的最小損失,不需將滅菌時(shí)間延長(cháng)。為保證高壓滅菌的效果,滅菌設備的驗證很關(guān)鍵。
1.2 過(guò)濾滅菌
可供過(guò)濾滅菌使用的濾膜很多,其材料多為polyethersulphone(PES)、尼龍、多聚碳酸鹽、醋酸纖維素、硝酸纖維素、PTFE、陶瓷等。一般情況下采取正壓過(guò)濾,正壓過(guò)濾較之負壓過(guò)濾具有流速高、過(guò)濾快、不易污染,可避免蛋白質(zhì)產(chǎn)生大量氣泡等優(yōu)點(diǎn)。一般使用過(guò)濾器可參照各供應商的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。
目前大多數實(shí)驗室和制采用微孔濾膜濾器(如Zeiss濾器)或立式微孔濾器(Millipore、Pall)除菌。微孔濾膜濾器為不銹鋼,中間可夾放0.22um濾膜。使用這種濾器最重要步驟是安裝濾膜及無(wú)菌過(guò)濾過(guò)程。如在使用Zeiss濾器時(shí),先要用培養用水將濾膜充分潤濕,在安裝濾膜時(shí)可在其上放置一層定性濾紙再固定。消毒時(shí)旋鈕不要扭太緊,凡與空氣接觸部位都要包好(可用牛皮紙、紗布、無(wú)紡布等);高壓滅菌后,在無(wú)菌環(huán)境中立即將旋鈕扭緊。過(guò)濾除菌結束后,要打開(kāi)濾器,檢查濾膜是否完整,如果濾膜破裂,需重新進(jìn)行過(guò)濾除菌過(guò)程。立式微孔濾器可以選用不同的微孔濾柱體積,因為濾膜的折疊,膜面積顯著(zhù)增大,液體處理量大,而且不容易發(fā)生堵塞現象。
純化水薄膜過(guò)濾器的濾杯沒(méi)有蓋子可以嗎?
純化水薄膜過(guò)濾器的濾杯,如果沒(méi)有蓋子的話(huà),正常使用是沒(méi)有關(guān)系的,但是如果長(cháng)期存放可能對后期使用會(huì )有影響,會(huì )使水質(zhì)下降。
微生物薄膜過(guò)濾器
放式兩用無(wú)菌檢查薄膜濾器。該產(chǎn)品具有兩種培養方法通用性的特點(diǎn)。設計合理,濾器過(guò)濾部分采用玻璃材質(zhì),化學(xué)性能穩定,密封度強,有效防止外源性污染,確保菌檢成功率。本儀器一次購買(mǎi)長(cháng)期使用,每次試驗每個(gè)濾頭損耗一張濾膜,無(wú)廢物處理,符合環(huán)保(GLP)要求,貴重藥液可以回收等優(yōu)點(diǎn)。極大節約試驗費用。本儀器不僅符合中國藥典2010年版和2005版(草案),亦可適用于英、美國及歐洲藥典.是適合國家藥品GMP認證的必備儀器。?